血清標本可按常規方法采集，應留意避免溶血，紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。如在冰箱中保留過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA試劑盒各個操縱步驟的留意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，嚴格遵照劃定操縱，必能得出正確的結果。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并留意不可濺出，不可產氣憤泡。有此測定（如間接法ELISA）需用稀的血清，可在試管中按劃定的稀釋度稀釋后再加樣。
在ELISA試劑盒中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液，再在其加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過一周測定的需低溫冰存。可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體 或抗原成份，ELISA試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保留。  
ELISA試劑盒的操縱因固相載體的形成不同而有所差異，海內醫學檢修一般均用板式點。除特殊情況外，在醫學檢修中均以血清作為檢測標本。加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應。每次加標本應更換吸嘴，以發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。的試劑，良好的儀器和準確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質量的。有些標本可直接進行測定（如血清 、尿液），有些則需經預處理（如糞便和某些分泌物）。