1、ELISA試劑盒樣品數量不一，加樣時間長短不一；
重復某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近。
2、樣品加入后未混勻；
加樣后在混勻器上充分混勻。
3、酶標儀濾光片不對或輸入波長不對；
TMB顯色用450/630波長.
4、酶標儀測定重復性差；
校對酶標儀。
5、洗滌不正確；
洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時反應板面向下，垂直用力甩凈內容物（可多甩幾次），在干凈、無或少塵的吸水材料上拍干。洗板機洗板時不應有堵孔，洗滌應充分。
6、溫育條件不一致（一次用水育，一次用恒溫箱）
恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應控制在37℃。
7、不慎多加或少加酶或顯色劑；
多加時顯色深，少加則淺，用記號筆圈上，便于分析。
8、閾值附近時陰時陽；
同一樣品做三個復孔，以二個（含二個以上相同結果為準）
9、ELISA試劑盒實驗加樣量不足、保溫時間、洗滌條件一致；