因此，在測定ELISA試劑盒樣的同時，繪制校準曲線為理想，否則應在測定試樣的同時，平行測定零濃度和中等濃度標準溶液各兩份，取均值相減后與原校準曲線上的相應點核對，其相對差值根據方法精密度不得大于5%~10%，否則應重新繪制校準曲線。

       ELISA試劑盒校準曲線的繪制: 用一系列被測物標準溶液，按照標準方法規定的步驟，將被測物轉變為有色溶液。制備好的標準系列和空白，在方法選定的波長下，測定吸光度。已被測物濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制校準曲線。1)對標準系列，溶液以純溶劑為參比進行測量后，應先作空白校正，然后繪制標準曲線;2)標準溶液一般可直接測定，但如試樣的預處理較復雜致使污染或損失不可忽略時，應和試樣同樣處理后再測定。 3)校準曲線的斜率常隨環境溫度、試劑批號和貯存時間等實驗條件的改變而變動。

       凡應用校準曲線的分析方法，都是在樣品測得信號值后，從校準曲線上查得其含量(或濃度)。因此，繪制準確的校準曲線，直接影響到樣品分析結果的準確與否。此外，ELISA試劑盒校準曲線也確定了方法的測定范圍。

【注意事項】

1、ELISA試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4、請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔一孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6、底物請避光保存。

7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9、本試劑不同批號組分不得混用。