ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型成為有色的氧化型，ELISA檢查試劑盒出現色彩反響。因而，可通過底物的色彩反響來斷定有無相應的免疫反響，色彩反響的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。
實際上每一測定系統應該用實驗求出各自的S/N的閾值。
更應留神的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。
現在主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運用的類型須取決于多個要素，包括微孔板的表面ELISA檢查試劑盒、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的封閉液應降低非特異性聯絡，但它不應當與抗原、抗體或檢查試劑發作彼此作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液廉價、安穩，在去掉洗刷過程中的一些非特異聯絡上很有用。
ELISA試劑盒測定方法中有三個必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
（2）酶符號的抗原或抗體，稱為“酶聯物"、“聯絡物"（conjugate）；
（3）酶反響的底物。依據試劑的來歷和標本的狀況以及檢查的具體條件，可規劃出各種不同類型的檢查方法。

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現已成功地應用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA檢查試劑盒寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，依據現已運用的作用，認為ELISA試劑盒法具有活絡、特異、簡略、敏捷、安穩及易于自動化操作等特色。
有的試劑盒中所設陰性對照為不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩沖液，致使反響后發作的本底或許較正常人血清的本底低得多。
ELISA試劑盒在實驗條件（包括試劑）較難保證安穩的狀況下，這種差異法較為合適。