轉(zhuǎn)染 ，是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。跟著基因與蛋白功用研討的深化，轉(zhuǎn)染現(xiàn)在已成為試驗(yàn)室工作中常常觸及的底子方法。轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類(lèi)途徑。電穿孔法、顯微打針和基因槍歸于通過(guò)物理方法將基因?qū)爰?xì)胞的*；化學(xué)介導(dǎo)方法許多，如經(jīng)典的磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法、和多種陽(yáng)離子物質(zhì)介導(dǎo)的技術(shù)；生物介導(dǎo)方法，有較為原始的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)染，和現(xiàn)在比較多見(jiàn)的各種病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)。
 志向細(xì)胞轉(zhuǎn)染方法，應(yīng)該具有轉(zhuǎn)染功率高、細(xì)胞毒性小等長(zhǎng)處。病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，是現(xiàn)在轉(zhuǎn)染功率的方法，同時(shí)具有細(xì)胞毒性很低的優(yōu)勢(shì)。但是，病毒轉(zhuǎn)染方法的預(yù)備程序雜亂，常常對(duì)細(xì)胞類(lèi)型有很強(qiáng)的選擇性，在一般試驗(yàn)室中很難廣泛。其它物理和化學(xué)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染方法，則各有其特色。
需求指出的一點(diǎn)，不管選用哪種轉(zhuǎn)染技術(shù)，要取得*優(yōu)的轉(zhuǎn)染效果，或許都需求對(duì)轉(zhuǎn)染條件進(jìn)行優(yōu)化。影響轉(zhuǎn)染功率的要素許多，從細(xì)胞類(lèi)型、細(xì)胞培養(yǎng)條件和細(xì)胞生長(zhǎng)情況，到轉(zhuǎn)染方法的操作細(xì)節(jié)，都需求考慮。
一、細(xì)胞傳代
1. 試驗(yàn)預(yù)備：200ul/1mlTip頭各一盒（以上物品均需高壓滅菌），酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用1ml的PBS溶液洗刷兩次。
3. 用Tip頭參與1ml Trypsin液，消化1分鐘（37℃，5%CO2 ）。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，查詢(xún)到細(xì)胞*從壁上脫落下來(lái)中止。
4. 參與1ml的含血清培養(yǎng)基中止反應(yīng)。
5. 用Tip頭屢次吹吸，使細(xì)胞*分散開(kāi)。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm離心5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇0.8X106個(gè)細(xì)胞參與一個(gè)35mm培養(yǎng)皿。
8. 將適合體積*培養(yǎng)液參與離心管中，混勻細(xì)胞后悄然參與培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
二、細(xì)胞轉(zhuǎn)染
1. 轉(zhuǎn)染試劑的預(yù)備
① 將400ul去核酸酶水參與管中，轟動(dòng)10秒鐘，溶解脂狀物。
② 轟動(dòng)后將試劑放在－20攝氏度保存，運(yùn)用前還需轟動(dòng)。
2. 選擇適合的混合比例（1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量）來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中參與適合體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。參與適合質(zhì)量的MyoD或許EGFP的DNA，轟動(dòng)后在參與適合體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次轟動(dòng)。
3. 將混合液在室溫放置10―15分鐘。
4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或許無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。
5. 參與混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)。
6. 屆時(shí)后，根據(jù)細(xì)胞品種決議是否移除混合液，之后參與*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24－48小時(shí)。
三、第2次細(xì)胞傳代
1. 在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)，查詢(xún)?cè)囼?yàn)效果并記載綠色熒光蛋白表達(dá)情況。
2. 再次進(jìn)行細(xì)胞傳代，按照免疫染色適合的密度0.8X105個(gè)細(xì)胞/35mm培養(yǎng)皿將細(xì)胞從頭轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿中。
3. 在正常條件下培養(yǎng)24小時(shí)后按照染色要求條件固定。