ELISA試劑盒將抗原抗體反應固相化：即試驗中的包被環節，使抗原或抗體吸附于固相載體表面。其機制可能是聚苯乙烯表面間的疏水基團可以無選擇性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不破壞蛋白分子結構，保持其生物學特性和免疫學活性；
封閉：固相吸附蛋白是非特異性的，在包被目的免疫蛋白后，未吸附蛋白的固相表面仍然有吸附其它蛋白的能力，為了保障抗原抗體反應的特異性，因此，包被剩余的固相表面應該用抗原抗體反應無關蛋白封閉。一般認為牛血清白蛋白是zui為理想的封閉劑，也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
抗原抗體反應：抗原或抗體在適當的介質下可進行特異的抗原抗體反應。
酶反應：酶可以通過共價鍵與抗原或抗體連接形成結合物，當抗原抗體反應的時候，被檢測靶目標中也結合了酶分子。
底物反應：結合在抗原抗體中的酶分子，可以促使底物發生顏色反應，檢測人員可以裸眼觀察，可以通過顏色來判定是否有免疫反應的存在，通過顏色的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量，也可借用酶標儀在適當的波長讀取吸光度值。
ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進行反應，并通過酶催化底物發生化學變化將抗原抗體反應通過顏色的形式顯現出來。